قاعدة تريس 77-86-1 البيولوجية العازلة Trometamol

قاعدة تريس 77-86-1 العازل البيولوجي التروميتامول

استخدامات Tris Buffer في التشغيل الكهربائي للبروتينات و Western Blotting

تعتبر عازلات Tris جزءًا لا يتجزأ من تحليل الكهرباء البروتينية والمسح الغربي. يتم تعزيز معظم جيلات SDS-PAGE والعازلات العاملة والعازلات العازلة مع Tris.جميع العازلات المشتركة متوفرة مخلوطة مسبقاً، أو، إذا كنت تفضل أن تجعل الخاص بك Tris العازل، يمكنك البدء مع مسحوق Tris تنقية، الجليسين، وغيرها من المفاعلات العازلة الدرجة البيولوجيا الجزيئية.

تستخدم معظم هلام SDS نظام عازل Tris المتقطع. يتم عادةً صياغة هلام التراص ، الذي يحتوي على مسام كبيرة بحيث يمكن لبتيدات أكبر الهجرة بسهولة.8عند هذا الحموضة، يهاجر أيونات الكلوريد المتأيونة بسرعة، مما يرفع الحموضة خلفها ويخلق منحدر الجهد مع منطقة منخفضة التوصيل،الذي يسبب الغليسين (من العازل الجاري) إلى التأين والهجرة وراء الجبهة الكلوريدمعظم الببتيدات في العينة، التي لديها شحنة سلبية بسبب SDS المرتبطة، تنتقل بين الكلوريد والجليسين، وتشكل شريطا ضيقا وبالتالي تصبح "متراكمة".

بمجرد أن يصل المجموعة إلى الهلام المحلول ، والذي يقع عند درجة حموضة أعلى (عادةً ما تكون درجة حموضة 8.7 ∼ 8.8) ، يؤدي زيادة آيونية الجليسين إلى تسريعها وتجاوز الببتيدات. بالإضافة إلى ذلك ، فإن الحمض النووي الذي يتم تحويله من الجليسين يضرب الببتيدات.يبدأ حجم المسام الأصغر من هلام الحل في أن يكون له تأثير غربة، مما يؤدي إلى فصل الببتيدات حسب الحجم.

تستخدم معظم بروتوكولات التلوث الغربية بوفر Tris ذو قوة أيونية منخفضة لنقل البروتين. يعتمد وقت النقل على نوع جهاز التلوث ومدى حجم الببتيد المثير للاهتمام.

استخدام Tris Buffer في الكهرباء الالكترونية لـ Nucleic Acid Agarose

تستخدم عازلات Tris على نطاق واسع للكهرباء الكهربائية لأجروز الحمض النووي. العازلتان الرئيسيتان هما TBE (Tris borate / EDTA) و TAE (Tris acetate / EDTA).على الرغم من أن هناك بعض الاختلافات في دقة أشكال مختلفة من الحمض النووي وحركيتها أثناء التشغيل الكهربائي، يمكن استخدام هذه العازلات Tris بشكل عام بشكل متبادل. أيونات البورات في TBE تمنع العديد من الإنزيمات، لذلك دون إجراء نوع من تنقية الحمض النووي بعد التشغيل الكهربائي،بعض التلاعبات المتوسطة بالأنزيمات قد لا تعملولذلك، فإن عازل TAE مفضل للاستخدام اليومي في معظم مختبرات الحمض النووي.

صنع محفظة تريس

عازل تريس هو خيار جيد لمعظم الأنظمة البيولوجية لأنه يحتوي على pKa حوالي 8.1 عند 25 درجة مئوية ، مما يجعله عازل فعال في نطاق حمض الحموضة 7 ٪ 9.هذه نطاق الحموضة مناسبة لمعظم العمليات البيولوجيةمسحوق تريس هو أيضا أرخص وأكثر قوة من العازلات المتخصصة مثل HEPES.

هناك طريقتان لصنع محلول Tris العازل، إحداهما صناعة محلولات من Tris base و Tris HClثم إضافة كميات صغيرة من محلول واحد (عادة Tris HCl) إلى محلول آخر (عادة Tris base) مع مراقبة الـ pH حتى يتم الحصول على الـ pH الصحيحفي الممارسة العملية، هذا نادراً ما يتم.

الطريقة المعتادة لصنع معظم عازلات Tris المستخدمة عادة هي البدء باستخدام قاعدة Tris فقط. يتم حل الكمية المناسبة من مسحوق Tris في الماء ، ويتم ضبط الـ pH مع HCl ،ومن ثم يتم جعل العازل حتى الحجم المطلوبعلى افتراض أنه لا يوجد تجاوز أثناء ضبط الـ pH ، هذه الطريقة لا تغير القوة الأيونية. ومع ذلك ، بعد تجاوز وإعادة ضبط مع NaOH ،أو باستخدام Tris HCl وتعديل الحموضة مع NaOH، هناك تغيير في القوة الأيونية. اعتمادا على الاستخدام المقصود من عازل Tris ، قد يكون هذا التغيير أو قد لا يكون مهما.

عند صنع عازل Tris ، من المهم استخدام كهرباء متوافقة مع Tris عند ضبط الـ pH.يمكن أن تظهر أجهزة الكترود Ag/AgCl ذات الصلة الواحدة عدم الاستقرار عند استخدامها مع عازلات Tris لأن الفضة تتساقط تدريجياً وتخنق الأجهزة الكترونيةيضمن استخدام الكهربائيات المرجعية ذات الارتباط المزدوج أو الكالوميل قياسات دقة لـ pH في عازل Tris.